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制備色譜柱的維護(hù)方法

更新時(shí)間:2021-04-08點(diǎn)擊次數(shù):2705

制備色譜柱的維護(hù)方法

The maintenance of the preparation of chromatographic column

 

一、建議使用保護(hù)柱,避免顆粒進(jìn)入色譜柱,引起堵塞;

 

二、建議選擇合適pH范圍的色譜柱,避免填料溶劑老化;

 

三、緩沖鹽的正確使用:

緩沖鹽通常使用不當(dāng)會(huì)析出,堵塞篩板和填料,使填料板結(jié),柱壓升高,阻礙基質(zhì)上鍵合相的碳鏈自由舒展,使色譜柱保留能力下降,柱效降低,縮短其使用壽命,緩沖鹽析出后很難去除,因此正確的使用緩沖鹽對(duì)延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命非常重要,具體方法如下:

“使用前過渡,使用后沖洗!”

1)等度條件:制備前后用過渡流動(dòng)相沖洗柱體積不少于20-30個(gè)柱體積,或制備完成后用過渡流動(dòng)相以1.0mL/min(根據(jù)柱規(guī)格調(diào)整)沖洗過夜;

2)梯度條件:制備前,用與初始流動(dòng)相組成相同的流動(dòng)相以工作流速?zèng)_洗色譜柱不少于20-30個(gè)柱體積,制備后,用該過渡流動(dòng)相沖洗色譜柱不少于20-30個(gè)柱體積,且梯度盡量平緩,避免緩沖鹽析出;

3)過渡流動(dòng)相:有機(jī)相和水相的比例和分析流動(dòng)相中兩相比例一致,或者水相比例高于分析流動(dòng)相,*不含緩沖鹽;

 

四、避免強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱保留:

強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱中的累積是一個(gè)緩慢的過程,引起峰變寬和拖尾,使柱效下降,保留時(shí)間變化,柱壓長(zhǎng)高;對(duì)復(fù)雜樣品很難判斷其是否含有強(qiáng)保留物質(zhì),因此要預(yù)防這一切的方式,堅(jiān)持每天分析完成后用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱20個(gè)柱體積以上。

清洗方法:

1)未使用緩沖鹽,每天使用完成后用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個(gè)柱體積以上;

2)使用緩沖鹽,用上述方法去除緩沖鹽后,用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個(gè)柱體積以上;

3)補(bǔ)救方法:水→乙腈→異丙醇(或氯坊)→乙腈→水,每一步需要沖洗不少于30個(gè)柱體積。

注意:不要輕易打開柱頭,因?yàn)橹^一旦打開,很難恢復(fù)到新柱的水平,因?yàn)橹^打開而造成的檢測(cè)后果,客戶自行負(fù)責(zé)。

 

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